Institut:Biochemie/kleine Protein Expression
Zum Test ob sich zuvor klonierte Proteine in E. coli expremieren lassen.
Methode
Bearbeiten- 1 ml einer Übernachtkultur werden zu 10 ml LB+AMP Medium in einen 50 ml Falcon gegeben
- Das Falcon wird fast waagerecht in den Schüttler gestellt und bei 37°C und 220 rpm geschüttelt
- Nach ca. Stunde werden 3 µl 1M IPTG zugegeben (Endkonzentration: 0,3 mM)
- Nach 0 (=sofort), 1, 2 und 3 Stunden werden je 50 µl abgenommen und mit 5 µl 10x SDS-Probenpuffer lysiert:
- Die Proben werden auf ein SDS Gel aufgetragen
- Eventuell wird ein Western Blot durchgeführt
Materialien
Bearbeiten- Übernachtkultur, LB+AMP Medium, 1M IPTG, PBS-Puffer, 10x SDS-Probenpuffer